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BCA蛋白定量法和Bradford蛋白定量法的優(yōu)缺點對比

更新時間:2022-06-28點擊次數(shù):4578
目前實驗室里常用的蛋白定量的方法通常主要有三種: BCA蛋白定量、Bradford蛋白定量法和紫外分光法。 

BCA 蛋白定量 的實驗原理是在堿性條件下,H | NH2----C-COOH | R 將Cu2+還原為CU+與 BCA 結(jié)晶為紫色的化合物,再通過測定 562 nm波長OD值來判定還原劑的含量。


下列表分別對兩種實驗方法做以對比:



通過上表中的的對比,我們不難看出Bradford實驗法的速度比較快,平常BCA 蛋白定量 的孵育時間大約30分鐘甚至更長,而采用Bradford蛋白定量法則需要幾分鐘即可完成實驗。


雖然其標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性擬合程度不如BCA定量法,但它的二項式契合度卻較高。
(下圖顯示為:二項式的標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方法)



除此之外,Bradford 蛋白定量還有一個小小的缺陷,那就是它比較容易受高濃度的去垢劑影響,比如需要SDS的實驗濃度低于0.01%,TRITON X-100的實驗濃度低于0.005%等。
解決的辦法是:使用與Bradford 兼容的去垢劑,從而匹配到相應(yīng)的實驗濃度即可。

      Bradford蛋白定量實驗雖然實驗在制作二項式標(biāo)線和公式計算較繁瑣,但如果能成功破解以上三個問題,那么Bradford法對比BCA法來說還是有不少優(yōu)勢的,比如可以節(jié)省很多時間等。對于追求實驗效率的實驗員來說,熟練掌握Bradford實驗法是個不錯的選擇。 

    蘇州阿爾法生物13年的生物儀器設(shè)備與耗材的行業(yè)經(jīng)驗,主要經(jīng)營凝膠成像 , 微量天平 Pcr 檢測儀、離心機、混勻儀、振蕩培養(yǎng)箱、二氧化碳振蕩培養(yǎng)箱、 微孔板振蕩器、二氧化碳培養(yǎng)箱、微生物發(fā)酵罐。還可以關(guān)注更多阿爾法生物其他產(chǎn)品如:蛋白定量試劑、滲透壓儀、電子天平、搖床、排槍移液器、渦混合、切膠儀、純水機、電泳儀、溶劑過濾器、真空泵、超低溫冰箱、離心管、實驗室試劑盒、干細(xì)胞培養(yǎng) 等系列產(chǎn)品。部分儀器可以免費試用, 瑞寧移液器 類目可免費校準(zhǔn),免費出具  CNAS 報告。生物試劑包括:BCA蛋白定量試劑盒、蛋白預(yù)制膠、緩沖液等。


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