瓊脂糖核酸電泳步驟

1.    用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈， 放在制膠平板上， 封閉模具邊緣， 架好梳子；

2.    根據(jù)欲分離 DNA 片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠：準(zhǔn)確 稱量瓊脂糖干粉， 加入到配膠用的三角燒瓶內(nèi)， 定量加入電泳緩沖液（一般

20~30 ml）；

3.    放入到微波爐內(nèi)加熱熔化。冷卻片刻， 加入一滴熒光染料，輕輕旋轉(zhuǎn)以充分

混勻凝膠溶液，倒入電泳槽中，待其凝固；

4.    室溫下 30~45 分鐘后凝膠全凝結(jié)， 小心拔出梳子， 將凝膠安放在電泳槽內(nèi)；

5.    向電泳槽中倒入電泳緩沖液，其量以沒過膠面 1mm 為宜，如樣品孔內(nèi)有氣

泡，應(yīng)設(shè)法除去；

6.    在 DNA 樣品中加入 10×體積的載樣緩沖液（loading buffer），混勻后，用槍

將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內(nèi)；

7.    接通電源， 紅色為正極，黑色為負(fù)極， 切記 DNA 樣品由負(fù)極往正極泳動 (靠

近加樣孔的一端為負(fù))。一般 60 ～ 100V 電壓，電泳 20 ～ 40min 即可；

8.    根據(jù)指示劑泳動的位置，判斷是否終止電泳；

9.    電泳完畢， 關(guān)上電源， 在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置，并與核酸分子

量標(biāo)準(zhǔn) Marker 比較被擴(kuò)增產(chǎn)物的大小。

膠回收純化 DNA

1.   瓊脂糖電泳，將特異電泳帶用刀切下放入到 EP 管中，稱瓊脂糖帶的重量；

2.   按照每 100mg 加 400µl 的量加入binding buffer，放入到 EP 管振蕩器中，45℃ ~

55℃溫育振蕩，直到所有的瓊脂糖都溶解（大概要 5 分鐘 ）；

3.   取出純化柱， 將上述溶解液轉(zhuǎn)移至柱中， 室溫下放置 2 分鐘， 8,000rpm   離心

1 分鐘，棄 EP 管中的液體，將純化柱放回 EP 管中；

4.   加 500µl 的 wash buffer 至柱中， 8,000rpm   離心 1 分鐘。棄管中的溶液；

5.   重復(fù)操作 4 步的操作 1 次，最后將純化柱放入 EP 管中 10,000rpm  離心 30 秒，

除去痕量的 wash buffer；

6.   將純化柱放入一個新的 EP 管。加 30~40µl H2O 或者 elution buffer 至純化柱膜 的中央，在37℃或 50℃下放置 2 分鐘， 10,000rpm 離心 1 分鐘洗脫 DNA，將

EP 管中的 DNA 溶液放在-20℃保存。

7.   注： 若想要不電泳而直接純化 DNA 溶液， 只需要在第 2 步中按 100µl 液量加 400µl 的 binding buffer,其余的步驟不變。