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如何選購合適的PCR耗材

如何選購合適的PCR耗材PCR耗材包括PCR管(EP管）、8連排管、96孔PCR板、深孔板等這些材質一般為聚丙烯PP材質，具有高品質、高純度、高透明的特點，一般都在潔凈空間生產加工。PCR耗材為什么一般都是PP材質的呢，為什么需要環境潔凈？因為PCR/qPCR耗材通常會與試劑或樣品直接接觸，而聚丙烯（PP）材質是生物學惰性材料，表面不易于粘附生物分子，且有著良好的化學耐性，及溫度耐受性（可以121℃高壓滅菌，也可以承受熱循環過程中的溫度變化）。這里強調一下耗材質量（是否干凈）...

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實時定量PCR技術中常見問題匯總

實時定量PCR技術中常見問題匯總實時定量PCR技術（real-timePCR）也叫qPCR（QuantitavePCR），是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，最后通過特定數學原理對未知模板進行定量分析的方法。它是一項臨床上非常成熟的技術，目前在分子生物學領域，qPCR核酸定量的主要方法。目前仍在全球肆虐的病毒鑒定的“金標準”——核酸檢測就是通過qPCR原理進行的。那么拿到一個樣本，需要經過以下多項操作流程才能定量檢測到它的核酸含量。其中...

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使用生物反應器研究乳腺癌亞型細胞外囊泡產生技術

使用生物反應器研究乳腺癌亞型細胞外囊泡產生技術使用傳統體外方法生產的EV的深入表征和驗證由于需要大面積的細胞單層和大量的培養基，培養可能具有挑戰性。該實驗方法使用貼壁細胞生物反應器系統以節省空間、資源和時間的方式同時培養多種不同亞型的乳腺癌細胞系，從而能夠持續生產大量用于下游實驗的EV。一、生物反應器接種、適應和維護培養基A：含有10%胎牛血清（FBS，Merck）和1%青霉素/鏈霉素（PS，Gibco）的DMEM（Gibco）。培養基B：AdvancedDMEM/F-12(...

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細胞培養常見問題匯總

細胞培養常見問題匯總1冷凍管應如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。2細胞冷凍管解凍培養時，是否應馬上去除DMSO？除少數特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞），在解凍之后，應直接放入含有10-15ml新鮮培養基之培養角瓶中，待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后...

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層析工藝放大需要遵循的原則

層析工藝放大原則包括線性放大原則和固定保留時間原則。線性放大原則線性放大原則是工藝放大過程中常用的原則，其核心思路是保持層析柱柱高和線性流速不變，只放大層析柱直徑和體積流速。固定的柱高和線性流速理論上可以保證相同的保留時間、層析中溶液用到的CV數和洗脫樣品CV數，較大程度保證相同的純化效果。線性放大原則的具體操作方法可參見下表：層析工藝在實際的應用過程中，線性放大可能會遇到幾個問題，一是層析設備供應商提供的層析柱都是幾個固定規格，可能無法適配具體某項的工藝需求；二是當層析柱直...

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