熒光定量PCR儀是一種基于聚合酶鏈式反應（PCR）和實時熒光檢測技術的分子生物學工具，它能夠精確測量DNA或RNA的濃度變化。以下是關于其工作原理與檢測技術的詳細解析：
1.PCR擴增過程
高溫變性：將雙鏈DNA解旋為單鏈狀態，以便后續引物結合。
低溫退火：引物與模板DNA互補配對，形成穩定的雜交體。
適溫延伸：在Taq酶的作用下，以引物為基礎合成新的DNA片段。
2.熒光信號實時監測
染料法（如SYBR Green I）：嵌入到雙鏈DNA中的熒光染料會發出熒光，隨著PCR循環進行，熒光強度逐漸增強。但需驗證特異性，常通過溶解曲線分析確認產物純度。
探針法（如TaqMan）：使用帶有報告基團和淬滅基團的特異性探針，當探針被降解時，報告基團脫離淬滅作用而發光，提供更高的特異性。
3.定量分析依據
Ct值（閾值循環數）：指熒光信號超過背景閾值時的循環次數，與起始模板量成反比關系。即Ct值越小，初始核酸濃度越高。
標準曲線法：通過已知濃度的標準品建立Ct值與濃度的對數線性關系，用于絕對定量未知樣品中的核酸濃度。
ΔΔCt法：以內參基因校正樣本間的差異，計算處理組相對于對照組的基因表達倍數，適用于相對定量實驗。
熒光定量PCR儀檢測技術解析:
1.儀器結構與核心組件
熱循環系統：采用半導體加熱/制冷技術，實現快速且精準的溫度控制，確保每個反應孔的溫度均一性誤差不超過±0.1℃。支持梯度PCR功能，可優化實驗條件。
熒光檢測系統：包括高亮度LED或激光光源激發熒光物質，以及高靈敏度的光電檢測器（如CCD或PMT）。主流儀器支持多通道檢測，可同時檢測多個靶標。
微電路控制系統：負責協調整個儀器的操作流程，包括溫度調控、熒光采集、數據處理等。配備觸摸屏界面，方便用戶設置參數和查看結果。
2.創新技術優勢
高精度溫控：半導體Peltier元件實現快速升降溫速率，多點校準保證孔間溫度一致性，滿足嚴格的實驗要求。
多色熒光支持：支持多種熒光染料和探針的組合，便于多重PCR實驗和復雜樣本的分析。
智能化操作平臺：預設常用實驗程序，自動識別耗材類型，內置故障自診斷系統，降低操作難度并提高設備可靠性。
數據分析軟件：自動計算Ct值、繪制標準曲線、進行熔解曲線分析和基因分型，數據導出符合GLP規范，便于科研管理和發表。
更新時間：2025-10-20
點擊次數：106
當前位置：
上一個：
返回列表
